El diagnóstico de Covid-19 se lleva a cabo por la detección de SARS-CoV-2 en un hisopado nasofaríngeo mediante la técnica RT-PCR. Esta técnica, si bien es altamente sensible, cuenta con la limitante del equipamiento necesario para realizar la técnica, los kits para la detección, y el tiempo que demora en ser realizada. El tiempo entre la toma de la muestra y la obtención del resultado puede tomar entre 24 y 72 horas, o incluso días, dependiendo del país en el que se realicen los tests, los recursos asignados, la saturación del sistema de salud y el personal capacitado para realizar la técnica.

La detección de casos positivos de Covid-19 es un cuello de botella que ha dificultado el control de la pandemia. Es así que la comunidad científica ha estado trabajando sobre un método alternativo, que sea más rápido y accesible para diagnosticar y evitar la propagación continua. El Institut Pasteur de Montevideo junto con la Facultad de Ciencias y Facultad de Química de la Universidad de la República, en Uruguay, han desarrollado y puesto a punto un método de detección denominado LAMP, a partir de muestras de hisopado, con una sensibilidad comparable a la obtenida en la técnica RT-PCR. Actualmente se está trabajando en la producción a gran escala de los reactivos para extender el acceso a esta técnica a distintas regiones del país.

El método LAMP (por sus siglas en inglés loop mediated isothermal amplification) es un novedoso método de amplificación de ácido nucleico isotérmico, que muestra una mayor sensibilidad y especificidad debido a una característica de amplificación exponencial que utiliza 6 secuencias objetivo diferentes, identificadas simultáneamente por distintos “primers” o cebadores en la misma reacción. Si bien es una técnica ya utilizada previamente, ha ido mejorando con el paso del tiempo. Los actuales ensayos LAMP que utilizan un total de seis cebadores reconocen ocho sitios distintos de la secuencia del objetivo. Para iniciar la síntesis se emplea una polimerasa de ADN que desplaza las cadenas, mientras que dos cebadores forman estructuras de bucle para facilitar y acelerar las rondas de amplificación posteriores. La técnica emplea dos cebadores internos (FIP y BIP) y dos externos (F3 y B3 que pueden reconocer un total de seis regiones distintas dentro del ADN objetivo); y además se emplean dos cebadores de bucle (cebador de bucle hacia adelante; LF, y cebador de bucle hacia atrás; LB) para acelerar la amplificación y la eficacia de la detección. Este método permite la detección de plantillas o “templates” de ADN y ARN en aproximadamente 1 hora, superando la eficiencia de la técnica RT-PCR que se utiliza preferencialmente para testear caso de Covid-19. Dado que el caso de casos sospechosos de padecer esta enfermedad es creciente, los centros hospitalarios y de diagnóstico se ven sobrecargados y muchos pacientes restan por ser examinados y tener sus resultados. Esta pérdida de tiempo resulta vital, ya que el paciente que está infectado y no lo sabe porque no ha sido testeado o porque su resultado aún no ha sido entregado, continúa propagando la infección.

Si bien el costo de reactivos es similar entre LAMP y RT-PCR, el costo en equipamiento que se requiere para LAMP es menor ya que no requiere termociclador con medida de fluorescencia en tiempo real. La lectura de los resultados de esta nueva técnica puede darse a simple vista, ya que el reactivo cambia de color rosado (negativo) a amarillo (positivo) en presencia del virus. Esto facilita mucho la comprensión de los resultados, al mismo tiempo que permite que no solamente expertos científicos en el área de biología molecular puedan analizarlos. Estos hechos levantarían una gran barrera, ya que posibilitaría la aplicación de puntos de testeo en diversos sitios, favoreciendo al control de la pandemia.

Actualmente Uruguay es uno de los países que realiza más tests por personas infectadas: se hacen más de 100 análisis por cada caso positivo encontrado. El Institut Pasteur de Montevideo y la Universidad de la República han puesto al servicio de los distintos gobiernos municipales esta técnica que ya se encuentra validada, para favorecer la rápida detección, principalmente en la frontera y en el interior del país. Al presente se está trabajando en la producción a gran escala de los reactivos para extender el acceso a esta técnica a distintas regiones del país.

Agradecemos a PhD. Gustavo Salinas, Investigador Principal del Institut Pasteur de Montevideo, a cargo del desarrollo de esta técnica, por sus aportes para la realización de este artículo.

Más información:
– Udelar e Instituto Pasteur presentan a intendentes nuevo test diagnóstico de COVID-19. Universidad de la República Uruguay. 28/08/20250. Extraído de:
https://udelar.edu.uy/portal/2020/08/udelar-e-instituto-pasteur-presentan-a-intendentes-nuevo-test-diagnostico-de-covid-19/

– Kashir, J., & Yaqinuddin, A. (2020). Loop mediated isothermal amplification (LAMP) assays as a rapid diagnostic for COVID-19. Medical hypotheses, 141, 109786.
https://doi.org/10.1016/j.mehy.2020.109786

– Farooq, U., Latif, A., Irshad, H., Ullah, A., Zahur, A. B., Naeem, K., Khan, S. U., Ahmed, Z., Rodriguez, L. L., & Smoliga, G. (2015). Loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP): a new approach for the detection of foot-and-mouth disease virus and its sero-types in Pakistan. Iranian journal of veterinary research, 16(4), 331–334.

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